RM新时代平台网址

細(xì)胞因子（cytokine，CK）是由免疫細(xì)胞（如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等）和非免疫細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。它們通過(guò)結(jié)合相應(yīng)受體，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和效應(yīng)，調(diào)控免疫應(yīng)答。它們通常在免疫原、絲裂原或其他刺激劑的作用下產(chǎn)生，并具有多種功能，包括調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等。根據(jù)其功能和特性，細(xì)胞因子可被分為不同的家族，如白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子和生長(zhǎng)因子等。細(xì)胞因子在人體內(nèi)發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，對(duì)于維持身體健康和預(yù)防疾病具有重要意義。

目前細(xì)胞因子檢測(cè)方法包括：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）、分子生物學(xué)測(cè)定法等。

1、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法，利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，將抗體固定在ELISA反應(yīng)板表面，加入含有抗原的待檢測(cè)樣本進(jìn)行結(jié)合，再加入有酶標(biāo)記的抗體，Z后加入顯影底物，采用比色的方法量化目標(biāo)分子?？捎糜跈z測(cè)和定量生物樣本種的微量物質(zhì)，特別是細(xì)胞因子等蛋白質(zhì)。

該方法可以用于檢測(cè)細(xì)胞因子的含量、細(xì)胞因子的亞型、細(xì)胞因子的受體等，也可用于檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌和細(xì)胞因子的功能研究。ELISA試劑盒因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，不需要特別昂貴的設(shè)備即可在實(shí)驗(yàn)室開展，頗受科研人員歡迎。隨著科研水平的提高，由于每種ELISA試劑盒只能測(cè)定單一目標(biāo)分子，當(dāng)用戶想研究多個(gè)蛋白表達(dá)情況時(shí)，需購(gòu)買多種試劑盒才能滿足需求，為了解決多次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中備受詬病的洗滌、拍板帶來(lái)的耗時(shí)、費(fèi)力問(wèn)題，科研人員可通過(guò)使用洗板機(jī)（Bio-Rad，Model 1575 Immunowash Microplate Washer #1707009）解放雙手以更好的完成檢測(cè)。

2、蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot，WB）

蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）是一種常用的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，用于檢測(cè)細(xì)胞或組織中特定蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。該方法的基本原理通過(guò)凝膠分離蛋白后轉(zhuǎn)印到載體膜上，然后通過(guò)特異性抗體去識(shí)別目標(biāo)蛋白，Z后根據(jù)顯影的灰度值或者熒光值分析蛋白量的表達(dá)，獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中的表達(dá)情況。

蛋白質(zhì)印跡法的步驟包括：電泳分離、轉(zhuǎn)膜、免疫印跡、顯色等。該方法可以用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。目前常見的檢測(cè)方式有化學(xué)發(fā)光和熒光兩種方式，以此來(lái)滿足用戶的多種需求。

3、液相芯片檢測(cè)技術(shù)

液相芯片技術(shù)是基于流式細(xì)胞術(shù)的原理來(lái)檢測(cè)蛋白的一種方法， 帶有磁性的聚苯乙烯微球中含有兩種或者三種熒光染料，通過(guò)熒光配比的不同可以分為幾百種不同的微球，分別標(biāo)記不同的編碼。每種編碼微球偶聯(lián)有不同蛋白的抗體，用于捕獲抗原，之后加入藻紅蛋白（PE）標(biāo)記的抗體，Z后上機(jī)完成檢測(cè)。每種微球可以用來(lái)檢測(cè)一種蛋白，當(dāng)將多種微球混合在一起時(shí)，便可同時(shí)檢測(cè)不同蛋白。上機(jī)時(shí)要求配備液相芯片系統(tǒng)，儀器通過(guò)紅色激光（635 nm）分類不同編碼的微球，確定每個(gè)編碼微球?qū)?yīng)的靶標(biāo)名稱，以定性是哪種蛋白或者核酸，再通過(guò)綠色激光（532 nm）檢測(cè)PE熒光強(qiáng)度，用于定量蛋白或者核酸。

Bio-plex 200（Bio-rad，Bio-Plex? 200 System With HTF #171000205）基于液相芯片技術(shù)研發(fā)了許多試劑盒，常見的試劑盒適用于多個(gè)物種，如：人類、非人靈長(zhǎng)類、小鼠、大鼠等，還可根據(jù)用戶需求定制不同的試劑盒。

4、Simoa技術(shù)（Simoa）

Simoa技術(shù)是基于微陣列芯片的單分子免疫檢測(cè)，其主要應(yīng)用領(lǐng)域包括腫瘤，神經(jīng)、感染性疾病和免疫炎癥等，目前在全球引用該技術(shù)發(fā)表的文獻(xiàn)有200篇左右，包括高分雜志Nature, Nature Biotechnology, JEM, JAMA Neurology等。Simoa技術(shù)的關(guān)鍵在于將免疫復(fù)合物捕獲并密封在一個(gè)含有超過(guò)20萬(wàn)個(gè)飛升級(jí)別小孔的芯片中反應(yīng)，大幅提升檢測(cè)靈敏度。故Simoa又稱作數(shù)字式ELISA，它的檢測(cè)靈敏度比傳統(tǒng)的免疫檢測(cè)技術(shù)平均高1000倍以上?？蓪?duì)傳統(tǒng)方法無(wú)法檢測(cè)到的低濃度生物標(biāo)志物進(jìn)行準(zhǔn)確分析，為生命科學(xué)研究、體外診斷、伴隨診斷和血液篩查等領(lǐng)域開創(chuàng)了新的研究前景。