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細胞凋亡的早期形態(tài)學改變是核染色質(zhì)濃聚、固縮,聚集在核膜周邊,然后是胞漿濃縮、胞膜起泡,繼而細胞核裂解成若干碎片,細胞膜將胞質(zhì)和染色質(zhì)斷片包裹,胞漿內(nèi)形成多個膜結(jié)構(gòu)尚完整的“小泡”及 “凋亡小體” (apoptoticbody)。這不同于細胞壞死的細胞腫脹、胞膜破裂、細胞崩解，但凋亡的細胞有固定的特征，因此誕生出細胞凋亡形態(tài)學檢測方法。

一、光學顯微鏡觀察

凋亡細胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時可碎裂。在HE染色的組織切片中細胞體積縮小，胞質(zhì)致密、嗜酸性染色增強，并可形成凋亡小體。在組織中凋亡細胞常以分散單個形式存在，凋亡細胞與周圍細胞分離，不引起炎癥反應(yīng)。

檢測方法：細胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細胞的形態(tài)改變，結(jié)合顯微測量工具可作凋亡細胞計數(shù)。

二、視頻時差顯微技術(shù)

細胞培養(yǎng)中常用，通過相差顯微鏡可動態(tài)觀察細胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細胞表和外形的變化。凋胞與基質(zhì)分離，胞體變圓、收縮、出泡，有的細胞拉長，出現(xiàn)釘狀突起，持續(xù)數(shù)小時后細胞膜破裂，細胞溶解，本方法可養(yǎng)壑培養(yǎng)中的凋亡細胞，但不能用于病理組織。

檢測方法：收集2×10^5細胞/ml培胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導(dǎo)劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細胞的動態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影，連續(xù)24小時。如同進進行熒光染色，可參熒光晃微鏡下觀察和攝影。

三、電子顯微鏡觀察

雖然光學顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細胞的形態(tài)學變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時期的變化。電鏡形態(tài)學觀察是迄今為止判斷凋亡Z經(jīng)典、Z可靠的方法,被認為是確定細胞凋亡的金標準。

檢測方法：透射電鏡標本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，丙酮脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸枸椽酸電子又重染色，透射電鏡觀察。掃描電鏡標本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，乙醇逐級脫水，CO2臨界點干燥，真空噴金，掃描電鏡觀察。

四、流式檢測

流式細胞儀檢測凋亡細胞是通過檢查其光射特征及熒光參數(shù)時行的。細胞穿過流式細胞儀的激光束集點時使激光發(fā)生散射，分析散射光可以提供細胞大小及結(jié)構(gòu)的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種，前向散射光的強度與細胞大小、體積相產(chǎn)，右向角射光的強度與細胞結(jié)構(gòu)的析射性、顆粒性（granu-larity）有關(guān)。

細胞凋亡過程中核酸內(nèi)切酶在DNA分子核小體間的降解，導(dǎo)致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，細胞熒光染色后作流式細胞儀分析，可以發(fā)現(xiàn)在DNA直方圖上正常二倍體細胞的Go/G1峰前出現(xiàn)一個亞二倍體峰（xub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡細胞。

根據(jù)此亞二倍體峰可以計算凋亡細胞的百分率。此外，流式細胞術(shù)還可以通過測定線粒體膜的電位、溶酶體質(zhì)子泵的活性及細胞DNA/總蛋白質(zhì)比例等方法辨認凋亡細胞。

檢測方法：獲取密度1×10^6細胞/ml左右的細胞懸液，精洗，固定，熒光染料染色，上流式細胞儀分析。

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。通常使用細胞凋亡檢測試劑盒，如常見的Annexin V熒光雙染法，其檢測原理為：Annexin V/ Annexin A5為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員，以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細胞漿膜的內(nèi)層，但在凋亡早期，膜不對稱性喪失，PS易位至細胞表面。熒光標記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合，表明該細胞為早期凋亡細胞。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現(xiàn)紅色熒光。