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污染是細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因之一。CO2培養(yǎng)箱應(yīng)具備良好的污染控制放置培養(yǎng)過程中的細(xì)胞污染。

污染源可分為直接或間接來源。直接來源是受污染的試劑、培養(yǎng)基或種子培養(yǎng)物。間接污染源包括實驗室表面、設(shè)備和人員。細(xì)菌主要通過交叉污染傳播。這可以通過良好的無菌技術(shù)、定期清潔和嚴(yán)格遵守設(shè)備定期維護計劃來防止。良好的設(shè)備功能設(shè)計和定期使用自動自凈化程序可進一步幫助減少污染。

一、污染物是如何進入CO2培養(yǎng)箱并擴散的呢？

CO2培養(yǎng)箱可能成為間接污染源。與生物安全柜不同，培養(yǎng)箱無法防止空氣污染物的流入，因為在日常使用過程中必須打開門。培養(yǎng)箱室也可能被無菌技術(shù)的粗心大意以及細(xì)胞培養(yǎng)容器中未被注意到的飛濺物所污染。一旦污染物進入培養(yǎng)箱，溫暖潮濕的環(huán)境會促進進一步的繁殖。如果未檢測到污染，且未執(zhí)行定期清潔和維護計劃，則會對培養(yǎng)物造成風(fēng)險。

二、如何控制二氧化碳培養(yǎng)箱中的污染？

使用適當(dāng)?shù)臒o菌技術(shù)以及定期的清潔和消毒計劃將有助于減少污染物的傳播。例如，鑒于CO2培養(yǎng)箱在使用過程中有時會伴有霉菌生長，為確保培養(yǎng)箱免受污染且保證儀器箱體內(nèi)的生物清潔性，可使用帶有紫外清潔功能的CO2培養(yǎng)箱；另外一種方式是安裝特有銅外殼HEPA濾器，能過濾培養(yǎng)箱內(nèi)空氣，可過濾除去99.97%的0.3um以上的顆粒，并能有效殺死過濾時被擋在濾器內(nèi)的微生物顆粒。

1、HEPA過濾器，需要腔室中的風(fēng)扇輔助空氣循環(huán)，以便通過濾清器吸入空氣。優(yōu)點是主動過濾空氣，但有幾個缺點：

（1）由于內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜，接縫和拐角處會滋生污染物。

（2）為了準(zhǔn)備清潔和消毒，需要花費更多的時間來拆卸裝置。

（3）腔室中產(chǎn)生的強制氣流可能導(dǎo)致細(xì)菌進入的可能性更高。太小而無法過濾掉的污染物會在整個腔室中傳播（例如支原體和病毒）。

（4）如果不能按照維護計劃更換過濾器，過濾器可能會堵塞并成為污染源。

2、紫外線是另一種旨在消除可能進入腔室的空氣和水源污染物的措施，廣泛應(yīng)用于箱體類產(chǎn)品中滅菌處理。UV技術(shù)的優(yōu)勢主要包括：

（1） 可以有效的殺死病毒、孢子、包囊、包括隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲

（2）殺菌完成后，沒有殘留，不會對實驗人員和目的培養(yǎng)物造成危害的剩余效應(yīng)

（3）UV殺菌是一個物理過程，它不是化學(xué)消毒劑，因而不涉及有毒/有害或腐蝕性化學(xué)品的產(chǎn)生、搬運、運輸或儲存等

此外，自動殺菌裝置能使箱內(nèi)溫度達(dá)到125℃從而殺死污染微生物，當(dāng)它與HEPA系統(tǒng)結(jié)合使用就能夠極大的減少污染。帶有氧化銅內(nèi)腔的培養(yǎng)箱，也同樣具有抗菌和抗生物活性特點。氧化銅會使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生游離氧，從而引起氧化損傷，DNA損傷，細(xì)胞器膜破壞，從而抑制微生物生長。氧化銅對多種微生物，如對弧菌、大腸桿菌、枯草桿菌、金黃葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門桿菌等的生長都有明顯的抑制作用。