RM新时代平台网址

在進行qPCR實驗后，所得到的數(shù)據(jù)是否可靠，是一個值得關(guān)注的問題。如果數(shù)據(jù)不可靠，就算趨勢符合預(yù)期，也不應(yīng)當(dāng)使用。

如何判斷qPCR數(shù)據(jù)是否可用

第一步：Ct值的評估

Ct值是判斷qPCR數(shù)據(jù)質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。以下是Ct值的一般標(biāo)準(zhǔn)：

1、：內(nèi)參基因的Ct值在14-18之間，目的基因在14-18之間。

2、良好：內(nèi)參基因的Ct值在12-20之間，目的基因在14-32之間。

3、勉強可用：內(nèi)參基因的Ct值在10-22之間，目的基因在14-35之間。

如果目的基因的Ct值超過了35，雖然數(shù)據(jù)仍然可以使用，但可能會對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，結(jié)果可能偏差很大。因此，如果Ct值偏高，建議重新進行實驗。

第二步：溶解曲線的檢查

Ct值之后，我們需要仔細檢查溶解曲線：

1、熔點(TM)：應(yīng)在75-90°C之間。

2、峰型：應(yīng)為單峰，無雜峰。

3、峰距：理想情況下，峰距應(yīng)在5個Tm單位內(nèi)。

第三步：擴增曲線的觀察

雖然擴增曲線可能不是大家經(jīng)常關(guān)注的點，但它同樣重要：

1、平臺期：曲線應(yīng)有清晰的平臺期。

2、熒光強度(Fluorescence)：至少應(yīng)在3以上。

3、二次抬頭：曲線不應(yīng)出現(xiàn)二次上升。

在大多數(shù)情況下，只要前兩個依據(jù)（Ct值和溶解曲線）沒有問題，你們就可以大膽地進入下一步進行數(shù)據(jù)分析。但為了確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，建議在完成qPCR后，也留意一下擴增曲線。