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Western Blot 是檢測(cè)混合樣品中單一特定蛋白的常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)。實(shí)驗(yàn)流程是先采用電泳將蛋白根據(jù)分子量大小在凝膠上進(jìn)行分離，然后再轉(zhuǎn)移到膜上，并用特定的抗體作為探針，對(duì)靶蛋白進(jìn)行檢測(cè)。其中轉(zhuǎn)膜也稱為轉(zhuǎn)印，轉(zhuǎn)印的方法有很多，包括電轉(zhuǎn)印、微量過濾斑點(diǎn)印跡、擴(kuò)散轉(zhuǎn)印和毛細(xì)管轉(zhuǎn)印。

通常電轉(zhuǎn)印、擴(kuò)散轉(zhuǎn)印和毛細(xì)管轉(zhuǎn)印用于電泳分離之后蛋白的轉(zhuǎn)印，而微量過濾斑點(diǎn)印跡直接將均質(zhì)溶液中的蛋白轉(zhuǎn)到膜上。

擴(kuò)散轉(zhuǎn)印依賴于分子的熱運(yùn)動(dòng)，使分子從高濃度區(qū)域轉(zhuǎn)移到低濃度區(qū)域，轉(zhuǎn)印效率低且大蛋白擴(kuò)散轉(zhuǎn)印十分困難。毛細(xì)管轉(zhuǎn)印使用平板凝膠干燥系統(tǒng)或其他真空裝置，將蛋白抽取到膜上，高真空容易粉碎凝膠和膜且凝膠放置時(shí)間長(zhǎng)易變干，需要大量備用緩沖液。一般擴(kuò)散轉(zhuǎn)印和真空轉(zhuǎn)印適合于定性實(shí)驗(yàn)，而Western Blot實(shí)驗(yàn)需要定量，因此電轉(zhuǎn)印更適合于Western Blot實(shí)驗(yàn)，也是目前Z常用的轉(zhuǎn)印方法，其轉(zhuǎn)印速度快，轉(zhuǎn)印效率高。

電轉(zhuǎn)印原理：使用電場(chǎng)力驅(qū)動(dòng)蛋白從凝膠中洗脫轉(zhuǎn)移到膜上。此過程中，膜和凝膠放置在一起，并在兩個(gè)電極之間放置濾紙。在電極之間施加電壓，蛋白在電場(chǎng)力的作用下遷移到膜上。原理圖如下：

電場(chǎng)強(qiáng)度（以V / cm為單位測(cè)量）決定轉(zhuǎn)印的效率，理論上場(chǎng)強(qiáng)越高，轉(zhuǎn)印越快；然而電場(chǎng)強(qiáng)度不是可以隨意增加的，因?yàn)樵陔娹D(zhuǎn)印過程中會(huì)產(chǎn)生熱量，焦耳熱增加了溫度并降低了轉(zhuǎn)印緩沖液/三明治的電阻，電阻的這種變化可能導(dǎo)致電場(chǎng)強(qiáng)度和轉(zhuǎn)印的不一致，或者可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)印緩沖液失去緩沖能力。因此實(shí)際試驗(yàn)中針對(duì)不同分子量的蛋白需要進(jìn)行轉(zhuǎn)印條件優(yōu)化，以防止轉(zhuǎn)印不足（蛋白不完全從凝膠中轉(zhuǎn)移到膜上）或轉(zhuǎn)印過度（蛋白穿透印跡膜造成損失）。

電轉(zhuǎn)印根據(jù)轉(zhuǎn)印設(shè)備和流程分為2種主要類型：濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。

濕轉(zhuǎn)：將凝膠和膜浸沒在裝滿緩沖液的槽中進(jìn)行蛋白電轉(zhuǎn)移的過程；可實(shí)現(xiàn)大多數(shù)常規(guī)蛋白的高效、定量轉(zhuǎn)印，且適合各種大小分子量范圍的蛋白轉(zhuǎn)印。濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)在選擇電壓設(shè)置、轉(zhuǎn)印時(shí)間和冷卻選項(xiàng)方面具有很大的靈活性。

半干轉(zhuǎn)：凝膠和膜夾在緩沖液潤(rùn)濕的濾紙之間，濾紙與平板電極接觸的轉(zhuǎn)印方式；電極之間的距離僅受凝膠和膜夾層厚度的限制決定，這樣就實(shí)現(xiàn)了高電場(chǎng)強(qiáng)度下的轉(zhuǎn)印。通常半干轉(zhuǎn)比濕轉(zhuǎn)更容易操作，高通量，且轉(zhuǎn)印時(shí)間短；同時(shí)這種方法可以使用不連續(xù)的緩沖體系。但半干轉(zhuǎn)不能使用主動(dòng)冷卻方式進(jìn)行溫度控制，一些小蛋白可能會(huì)因高場(chǎng)強(qiáng)而被驅(qū)動(dòng)穿過膜。此外，由于低緩沖容量限制了運(yùn)行時(shí)間，一些大的蛋白可能轉(zhuǎn)印效果不佳?？焖侔敫赊D(zhuǎn)屬于半干轉(zhuǎn)的一種。

實(shí)驗(yàn)操作圖（以半干轉(zhuǎn)為例）如下：

濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)比較見下圖：

全能型轉(zhuǎn)印系統(tǒng)Trans-Blot Turbo優(yōu)點(diǎn)如下：

快速轉(zhuǎn)印-預(yù)設(shè)方案

3 min方案 — 在 3 分鐘內(nèi)完成 Mini-PROTEAN TGX 凝膠的超快速轉(zhuǎn)?。ǖ鞍追肿恿糠秶?–150 kD）

7 min方案 — 在 7 分鐘內(nèi)高效轉(zhuǎn)印 4塊個(gè)小型或 2 塊中型凝膠（蛋白質(zhì)分子量范圍：5–150 kD）

10 min方案 — 在 10 分鐘內(nèi)高效轉(zhuǎn)印 4塊小型或 2 塊中型凝膠（蛋白質(zhì)分子量范圍：25–300 kD）

超高轉(zhuǎn)印效率

與其他印跡技術(shù)相比較，使用 Trans-Blot Turb 系統(tǒng)可獲得更高的轉(zhuǎn)印效率。下圖顯示 Trans-Blot Turbo 系統(tǒng)成功轉(zhuǎn)印 1.25 ng 蛋白條帶。

高通量，模塊化設(shè)計(jì)

高通量：可以同時(shí)轉(zhuǎn)印4塊小型膠或者2塊中型膠。

模塊化：轉(zhuǎn)印裝配模塊與主機(jī)獨(dú)立設(shè)計(jì)，組合運(yùn)用。