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Bio-Rad伯樂凝膠成像圖像分析軟件ImageLab實(shí)踐操作
2023-11-10 14:30:45 作者: 高思維醫(yī)療 3556

Bio-Rad著力于提供完整的實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)解決方案,具備一系列專為蛋白、核酸及其他樣品成像所設(shè)計(jì)的產(chǎn)品(如下),包括直觀的數(shù)據(jù)采集設(shè)備和分析軟件。所有圖像分析軟件均采用imagelab軟件進(jìn)行分析,該軟件具備強(qiáng)大的分析功能,可不限次安裝于個人電腦進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及導(dǎo)出。

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軟件安裝成功后,可以對Bio-Rad成像儀采集的圖像進(jìn)行泳道、條帶、灰度值、分子量、相對表達(dá)量等進(jìn)行分析,使用教程如下:


一、雙擊打開ImageLab軟件,導(dǎo)入要分析的樣本圖像。


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在圖像工具里可對當(dāng)前圖像進(jìn)行水平垂直方向的翻轉(zhuǎn),另外如果樣品在拍攝時(shí)有擺放不正的現(xiàn)象,也可通過“自定義”功能進(jìn)行旋轉(zhuǎn),當(dāng)圖像上出現(xiàn)紅色十字標(biāo)記時(shí),右鍵點(diǎn)選“旋轉(zhuǎn)”即可完成。此外還可根據(jù)情況使用“剪切”功能去除不需要分析的區(qū)域,使用“合并”功能對同時(shí)打開的兩張圖像進(jìn)行疊加合并等。


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二、“泳道和條帶”工具用于對當(dāng)前圖像上的信息進(jìn)行識別。點(diǎn)擊“泳道—自動”,軟件自動完成所有泳道的檢測。如需調(diào)整,也可采用“手動”功能獲取泳道信息。


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在“條帶”檢測工具下,可自行設(shè)定檢測靈敏度以識別圖像上的條帶。同時(shí)也可手動添加或刪除某個條帶。


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三、“MW分析工具”能通過已知的標(biāo)準(zhǔn)品分子量信息檢測未知樣品中各條帶的分子量信息。點(diǎn)擊“更改”,顯示“管理標(biāo)準(zhǔn)”窗口,選定maker信息,同時(shí)在圖片上勾選相應(yīng)泳道,打開分析表,即可顯示所有條帶的分子量信息。


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四、“定量工具”可選定某一個條帶為對照,展示其他條帶相比于對照的表達(dá)量變化情況,如下圖,選定的條帶上會顯示綠色的“R”,打開分析表,“相對定量”列里可顯示不同的表達(dá)信息。此外也可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品信息進(jìn)行絕對定量。


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五、對于western blot結(jié)果的定量通常用到“體積工具”。點(diǎn)選“矩形工具”,在western blot圖像上選定條帶范圍,圖像上顯示選擇框,用復(fù)制粘貼的方式復(fù)制多個選擇框,并將其拖拽到不同條帶位置處(如下圖)。雙擊圖像上的對照條帶,選取“參考體積”,打開“分析表”,列表中顯示所有條帶的相對定量數(shù)值,可將此分析表導(dǎo)出到Excel表格進(jìn)行后續(xù)數(shù)據(jù)的分析。


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六、此外,ImageLab還具備獨(dú)有的western blot結(jié)果計(jì)算方式,該方式以泳道總蛋白質(zhì)表達(dá)量為內(nèi)參,不用再對看家蛋白進(jìn)行分析,不僅是對western blot實(shí)驗(yàn)過程的簡化,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析也更為便捷。創(chuàng)建多通道圖像,同時(shí)打開總蛋白質(zhì)圖及目標(biāo)蛋白blot圖,在軟件上選取總蛋白圖(圖示為Stain Free Blot)為參照通道,同時(shí)選取相應(yīng)泳道為參照泳道。軟件自動分析兩張圖上的泳道及條帶灰度值(圖示為調(diào)整泳道總體積)。點(diǎn)擊分析表,展示每條泳道的歸一化因子。該因子代表不同泳道上樣量的差異。Z終以目標(biāo)蛋白各個泳道調(diào)整泳道總體積乘該泳道歸一化因子即為該蛋白的Z終表達(dá)情況。只需簡單幾步操作即可獲得western blotZ終數(shù)據(jù)結(jié)果。


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