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PCR擴(kuò)增的增強(qiáng)劑和抑制劑有哪些？

01增強(qiáng)劑

1. 激活劑：激活劑通過(guò)改善聚合酶的活性，讓整個(gè)PCR過(guò)程煥發(fā)活力。10~100ug/ml BSA（牛血清白蛋白）就能在某些情況下提升聚合酶的穩(wěn)定性和活性。

2. 保護(hù)劑：保護(hù)劑的作用在于防止模板DNA降解，確保DNA的完整性。如T4基因32蛋白能保護(hù)單鏈DNA不受核酸酶攻擊。

3. 增效劑：增效劑能夠提高引物與模板間的親和力，從而提升擴(kuò)增的特異性。1%~10%DMSO（二甲基亞砜）就是一種常用的增效劑，能使PCR反應(yīng)在較高溫度下進(jìn)行，有助于解決模板二級(jí)結(jié)構(gòu)引起的問(wèn)題。

4. 促進(jìn)劑：促進(jìn)劑填補(bǔ)反應(yīng)體系中的空隙，為聚合酶提供適宜的工作環(huán)境。例如，5%~20%甘油或1.25%~10%甲酰胺可以在某些困難的擴(kuò)增中作為促進(jìn)劑使用。

5. 凈化劑：凈化劑清除可能干擾PCR反應(yīng)的雜質(zhì)。例如，某些特殊的蛋白酶抑制劑可以防止樣本中的蛋白酶干擾反應(yīng)。

6. 調(diào)節(jié)劑：調(diào)節(jié)劑負(fù)責(zé)微調(diào)PCR反應(yīng)的各項(xiàng)參數(shù)，如離子濃度等。Mg^2+濃度的適當(dāng)調(diào)整就能顯著影響PCR的特異性和產(chǎn)量。

7. 鏈接劑：鏈接劑加固引物與模板之間的連接。比如，有些特定的寡核苷酸可用作“鎖式探針”，與目標(biāo)序列形成穩(wěn)固的結(jié)構(gòu)，以輔助擴(kuò)增。

02抑制劑

SDS:離子去污劑，0.01%即可完全抑制PCR反應(yīng)，0.005%可顯著降低產(chǎn)量

苯酚:0.5%即可完全抑制PCR反應(yīng)，0.2%可顯著降低產(chǎn)量

乙醇:大于1%的濃度可抑制PCR反應(yīng)，但在某些體系里又能增加產(chǎn)量

異丙醇:抑制作用比乙醇稍強(qiáng)

乙酸鈉:大于5mM時(shí)抑制PCR反應(yīng)

氯化鈉:大于25mM時(shí)抑制PCR反應(yīng)（生理鹽水無(wú)影響）

EDTA:0.5mM可使PCR產(chǎn)物減少，1mM完全沒(méi)有PCR產(chǎn)物

血紅素（heme）-來(lái)源：血液，大于1mg/ml抑制PCR反應(yīng)

氯高鐵血紅素（hemin）：大于0.1ng/μl抑制PCR反應(yīng)

丹寧酸（tannic acids）：大于0.1ng/μl抑制PCR反應(yīng)

肝素：大于0.15IU/ml抑制PCR反應(yīng)

尿素-來(lái)源：尿，大于20mM時(shí)產(chǎn)生抑制

腐殖質(zhì)-來(lái)源：土壤，植物材料，自然界水

植物多糖-來(lái)源：糞便，植物多糖

聚苯乙烯，聚丙烯-來(lái)源：紫外線照射塑料管

膽酸鹽-來(lái)源：糞便

膠原質(zhì)-來(lái)源：組織

靛青染料-來(lái)源：粗斜紋棉布，牛仔褲

蛋白酶-來(lái)源：牛奶

鈣離子-來(lái)源：牛奶，骨頭

鐵離子-來(lái)源：血液

二甲苯胺

溴酚蘭

膽紅素（bilirubin）

其他抑制劑