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CO2培養(yǎng)箱的維護(hù)與保養(yǎng)

每位細(xì)胞培養(yǎng)箱的使用者都需要了解幾個重要的問題，以確保培養(yǎng)箱處于優(yōu)質(zhì)狀態(tài)工作。這里提供的信息將幫助您避免常見的錯誤。請注意，盡管這些建議普遍適用于任何 CO2 培養(yǎng)箱，我們?nèi)越ㄗh您查閱您的用戶手冊，以確保按照制造商推薦的方法。

二氧化碳培養(yǎng)箱的放置

培養(yǎng)箱的放置位置可以改變它的性能。通風(fēng)，氣流，室溫，陽光直射都可以影響溫度和濕度功能。

當(dāng)安裝一個 CO2 培養(yǎng)箱，只能由底部的兩側(cè)抬起 CO2 培養(yǎng)箱，禁止從正面和背面抬起，永遠(yuǎn)不要從門的位置抬起培養(yǎng)箱。不要將培養(yǎng)箱直接在地面上。需要使用一個支架。如果培養(yǎng)箱直接放在地面上，每次門打開時產(chǎn)生的空氣流動會直接掃起污垢、灰塵和污染物進(jìn)入培養(yǎng)箱。如果需要當(dāng)堆疊培養(yǎng)箱，應(yīng)該只堆疊同類品牌的培養(yǎng)箱。堆疊不同的培養(yǎng)箱， 由于沒有機(jī)械固定，會有培養(yǎng)箱翻倒或滑脫的危險。

接下來，確保培養(yǎng)箱的四周有足夠的空間。利于通風(fēng)和接入電源線和連接器，包括氣體連接。盡可能把培養(yǎng)箱放置在遠(yuǎn)離公共區(qū)域，但要避免可能有真菌生長的潮濕、濕潤的角落。確保設(shè)備避免空氣流通和其他氣流，因為這些氣流可直接污染——攜帶污垢和灰塵進(jìn)入培養(yǎng)箱。不要將培養(yǎng)箱放置在陽光直射下，因為外部溫度波動可影響抗冷凝系統(tǒng)。所以，確保培養(yǎng)箱前后和側(cè)方水平——通過調(diào)整調(diào)平腳或支架。

安裝

每個培養(yǎng)箱關(guān)于連接和編程的模式是不同的，但也有一些適用于所有培養(yǎng)箱的一般準(zhǔn)則。開始正確地安裝培養(yǎng)箱將有助于為您的細(xì)胞提供優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)條件。

培養(yǎng)箱正確放置之后，清潔和消毒培養(yǎng)箱內(nèi)部，擱板和擱板座，以及通風(fēng)管道（如果適用）（請參閱下面的清潔建議）。消毒后，按照制造商的指示安裝這些和任何其它內(nèi)部組件。

注意：如果有自動加熱消毒/殺菌程序，可以跳過手動消毒步驟，只需運行自動程序——假定程序已經(jīng)被驗證可以去除公認(rèn)的生物指示物。一種自動化高溫程序還省去了高壓滅菌任何內(nèi)部部件的需要。值得一提的是Thermo Scientific VIOS 系列產(chǎn)品具有高溫循環(huán)，不需要拆除探頭就可運行此循環(huán)。如果使用的是早期的型號和許多其他制造商的都必須先去除傳感器。

當(dāng)培養(yǎng)箱清潔、消毒過，貨架配件到位，您可以安裝任何額外的可選部件，如氧傳感器或 HEPA 過濾器。Thermo Fisher Scientific 公司的腔體內(nèi) HEPA 過濾系統(tǒng)每 60 秒將過濾整個腔室的空氣量，每次開門之后5 分鐘內(nèi)在室內(nèi)會建立ISO-5 的潔凈室空氣質(zhì)量 1。注意：不是位于所述腔室內(nèi)部的 HEPA 過濾器將不會遇到與細(xì)胞相同的條件，并不能提供保證相同的水平。處理 HEPA 過濾器和氣體傳感器必須非常小心， 因為它們很容易損壞。

如果您擁有水套式培養(yǎng)箱，確保水套中裝滿水。并 且，用無菌蒸餾水填充水盤注水高度到離頂部 1/2 英寸（1.25 厘米）。保持水盤滿是很重要的，確保濕度和溫度處于優(yōu)質(zhì)的生長條件。

現(xiàn)在，使用電子產(chǎn)品和按照制造商的指南，設(shè)定溫度，高溫值，低溫值，CO2 與 O2 設(shè)定值，以及適當(dāng)?shù)膱缶?。如果您擁有一臺帶 iCAN 接口的 Thermo Scientific 二氧化碳培養(yǎng)箱，您可以設(shè)置數(shù)據(jù)記錄參數(shù)。根據(jù)您的設(shè)置，iCAN 會收集數(shù)據(jù)進(jìn)行長達(dá)一個星期的存儲，或者導(dǎo)出到 Microsoft Excel。這個信息不僅對 GMP 監(jiān)測，而且對查明問題是非常有用的。

CO2 監(jiān)測

有兩種二氧化碳?xì)怏w傳感器。第一個是為 T/C（熱導(dǎo)率）傳感器。Thermo Scientific 的培養(yǎng)箱提供 T/C 的傳感器是非常穩(wěn)定、準(zhǔn)確和經(jīng)濟(jì)的。經(jīng)久耐用，物美價廉和功能強(qiáng)大的 T/C 傳感器是現(xiàn)在流行的 CO2 控制方法。而 IR（紅外線）傳感器更適合包括 GMP（良好操作規(guī)范）等相關(guān)應(yīng)用的監(jiān)測，或當(dāng)培養(yǎng)箱門在短時間內(nèi)需要反復(fù)打開； 一些制造商將傳感器設(shè)計為放置在培養(yǎng)箱外面， 以避免在滅菌過程中去除它們；這不是一個好的選擇，因為外部傳感器與細(xì)胞將面臨不相同的條件。因此，這使得培養(yǎng)箱無 法對影響細(xì)胞生長的變化迅速作出反應(yīng)。

CO2 氣體連接

Thermo Scientific 培養(yǎng)箱的連接 CO2 鋼瓶，必須使用在高壓氣瓶的出口閥上備有二級的二氧化碳壓力調(diào)節(jié)器。這是因為我們的培養(yǎng)箱輸入壓力必須保持在15±5psi (1 Bar)，使 CO2 控制系統(tǒng)正常運作。簡單的單級調(diào)節(jié)無法保持這種壓力，這將導(dǎo)致二氧化碳的 濃度控制不精準(zhǔn)。

我們建議使用至少 99.5％純度醫(yī)用級的氣體，因為在氣體中的雜質(zhì)可以對細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面影響。CO2 氣體鋼瓶不應(yīng)該包含虹吸管，并備有二級的二氧化碳壓力調(diào)節(jié)器，并設(shè)定到培養(yǎng)箱中的輸入壓力在 15psi（1bar）。連接管道到空氣過濾器，然后到培養(yǎng)箱的背面標(biāo)有鋸齒狀的接頭，一定要使用軟管夾，并檢查是否漏氣，否則將可能對您和其他實驗人員造成危險。當(dāng)培養(yǎng)箱已正常運行 24 小時，用 NIST（美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院）或其他機(jī)構(gòu)校驗的溫度計校準(zhǔn)溫度，并用富賴特二氧化碳測定儀或外部 IR 測量計檢查 CO2。

添加額外的設(shè)備

一些研究人員想要添加的電氣設(shè)備，如搖床，旋轉(zhuǎn)器或攪拌器到 CO2 培養(yǎng)箱。這些設(shè)備的散熱將導(dǎo)致培養(yǎng)箱的內(nèi)部溫度升高，并且培養(yǎng)箱電子的補(bǔ)償希望將應(yīng)對這些額外的熱量。搖床產(chǎn)生振動和熱量，因此搖床的轉(zhuǎn)速設(shè)置不得超過120rpm，以盡量減少影響貼壁細(xì)胞附著和生長。如果確實要在培養(yǎng)箱內(nèi)使用相關(guān)設(shè)備，需購買 Thermo Scientific 的專用搖床 88881102，或考慮購買配置有冷卻盤管和冷水機(jī)組的水套培養(yǎng)箱，這將彌補(bǔ)產(chǎn)生 的額外熱量。

作為搖床的替代，Thermo Scientific 的Heracell 240i 提供滾瓶組件，其不產(chǎn)生熱量。每一個替代的架子， 這樣您就可以在里面添加多達(dá) 4 個設(shè)備，給您更多的培養(yǎng)靈活性。

 減少污染

實驗室的潔凈度對于減少培養(yǎng)基被污染概率至關(guān)重 要。實驗室中的灰塵和污垢隨著人們在房間走動或 打開和關(guān)閉的門的間隙散布在空氣中。一般室內(nèi)空 氣中含有每立方米 100?1000 的微生物，這其中大部分來自于生活在我們的皮膚的萬億正常菌群。這 意味著，每次您打開培養(yǎng)箱的門，污染物都可以進(jìn) 入。所以重要的是通過經(jīng)常清潔實驗室，至少每月 一次或兩次,以減少實驗室的污染物和灰塵。清潔和 消毒生物安全柜，水浴，離心機(jī)和顯微鏡。消除冰箱和冰柜內(nèi)或周圍的紙板，因為紙板可以弄濕，然 后滋生真菌。不要將物品放在培養(yǎng)箱的頂部，因為 物品周圍的灰塵和污垢可以在一開門產(chǎn)生的空氣流 被掃進(jìn)室內(nèi)。請記住清理實驗室角落以及和設(shè)備上 下有灰塵可以聚集的地方。

培養(yǎng)箱消毒劑

許多研究者問：哪些消毒劑可以在 CO2 培養(yǎng)箱使用？ 事實是有許多可供選擇的消毒劑，但不是所有的都對細(xì)胞安全。一些強(qiáng)力消毒劑散發(fā)煙氣進(jìn)入培養(yǎng)箱， 影響細(xì)胞生長。這些煙霧含有的 VOC（揮發(fā)性有機(jī)化學(xué)物質(zhì)），可以誘導(dǎo)熱休克和其他應(yīng)激蛋白的表達(dá)。 普通實驗室化學(xué)品，如苯酚，異戊醇和 β-巰基乙醇都是 VOC，而且實驗室清潔產(chǎn)品和消毒劑，甚至地板清潔劑和蠟都產(chǎn)生有害氣體?？傊?，如果那些使你感覺不好的強(qiáng)烈氣味，對于細(xì)胞培養(yǎng)同樣不利。實驗者越來越關(guān)注 VOC 對細(xì)胞培養(yǎng)的危害性了。Thermo Scientific 部分培養(yǎng)箱可以選配去除VOC 的特制HEPA 濾膜。

賽默飛技術(shù)團(tuán)隊研究和測試了一些不同類型的消毒劑。我們尋找的消毒劑滿足以下條件：對各種微生物效果廣泛，同時對培養(yǎng)箱組件無害（無腐蝕性）。 所有的這些測試，要符合我們要求的化合物是季銨鹽消毒劑。這種消毒劑可以非常方便購買到。例如Lysol No Rinse（前身 Roccall-D），Conflikt（北美）和 Fermicidal-D（歐洲）。使用 2％濃度季銨鹽消毒液。消毒培養(yǎng)箱內(nèi)部，并作為水盤的消毒添加劑 3。必須強(qiáng)調(diào)，禁止使用含漂白劑的清潔劑。含氯漂白劑及其氧化活性衍生物會腐蝕不銹鋼和銅。此外，這些化學(xué)物質(zhì)對細(xì)胞毒性很大！

清潔培養(yǎng)箱

保持培養(yǎng)箱正常運作，避免細(xì)胞污染，需要定期清潔培養(yǎng)箱，這項工作很辛苦，但非常必要和有效。仔細(xì)   按照以下步驟清潔培養(yǎng)箱，有利于減少污染，保持細(xì)胞生長良好。如果您選配的培養(yǎng)箱具有自動高溫消毒功能，將有效地消除細(xì)菌和真菌，而不需要使用消毒劑。定期清潔培養(yǎng)箱還是必要的工作，以清溢出的液   體或灰塵。

1. 取出培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)物。如果清洗時間不長，可以將其保存在干凈，無菌的容器中，保持其溫度。關(guān)閉培養(yǎng)箱，包括關(guān)閉供氣閥。

2. 取出所有隔板，隔板支架，以及所有附件、空氣管道。清空水盤并用干凈的無絨布擦干。

3. 用溫和的肥皂水清潔所有的內(nèi)表面，管道，隔板，隔板支架，內(nèi)門，風(fēng)扇和門封條。使用溫和的洗潔精  擦拭，去除所有隱藏的角落和縫隙中污垢、灰塵。圓角設(shè)計的培養(yǎng)箱更利于清潔工作。

4. 用蒸餾水沖洗箱體內(nèi)壁和部件，并用干凈的無絨布再一次擦干。

5. 用稀釋的季銨鹽消毒劑擦拭內(nèi)壁和部件。用 70％酒精擦拭以除去任何剩余的消毒劑痕跡。再次強(qiáng)調(diào)， 一定要擦到所有的角落，并記得安好門封條，更換內(nèi)部零件。

6.  加熱培養(yǎng)箱，讓培養(yǎng)箱完全干燥。這應(yīng)該只需要花一點時間，所以不要讓門開著——那只會重新引入新的灰塵和污物！

7. 如果選配的培養(yǎng)箱具備自動消毒功能，請立即運行。在周期完成之后，用無菌蒸餾水填充儲水器，并打開氣閥。

8. 記得清洗培養(yǎng)箱外壁，以消除可能進(jìn)入的污垢和微生物。如果培養(yǎng)箱的頂部非常臟，當(dāng)打開培養(yǎng)箱門灰   塵很可能進(jìn)入，所以清潔頂部是很重要的。用無絨布蘸溫和的肥皂水。然后用干凈的布蘸清水擦拭干凈。用干凈的干布擦干外面。特別要注意每個人都接觸的門把手。不要使用任何液體或噴霧清潔劑清潔觸摸   屏顯示器。而需要使用干的超細(xì)纖維布來清潔這些。

就是這樣，就大功告成了！當(dāng)培養(yǎng)箱達(dá)到設(shè)定的條件下，將培養(yǎng)物放回到培養(yǎng)箱中。

我們經(jīng)常被問“怎么清理  100％純銅培養(yǎng)箱？”您可以使用與不銹鋼相同的步驟來清潔銅，包括溫和的肥皂水， 其次是 70％的乙醇擦拭。同樣可以選擇使用季銨鹽消毒劑，但不是必須，因為純銅自身就具有殺菌能力。

調(diào)整水的重要性

為了提供您所培養(yǎng)細(xì)胞所需的適當(dāng)濕度，我們建議只用無菌蒸餾水。自來水含有少量的氯會腐蝕不銹鋼或純銅。此外，自來水可能含有大量細(xì)菌和礦物質(zhì)。由于細(xì)胞生長培養(yǎng)基中的鹽和礦物質(zhì)是精確平衡的，過多的礦物質(zhì)將導(dǎo)致細(xì)胞生長受到影響。

去離子水或一級超純水不可以使用。它會腐蝕不銹鋼，因為水中含有非常少的離子，它將從不銹鋼， 純銅，玻璃門，和其他培養(yǎng)箱部件中獲得離子。反滲透水可能在質(zhì)量方面千差萬別，如果起始水是500 ppm（百萬分之一），成品水可能是 50ppm，但如果起始水有150ppm，成品水可能是 15ppm。

我們的技術(shù)團(tuán)隊對水質(zhì)進(jìn)行廣泛的測試。根據(jù)這些測試和和考慮延長培養(yǎng)箱的壽命，我們建議的無菌蒸餾水，pH 為 7-9，電導(dǎo)率 1-20微西門子（電阻率50K-1M 歐）。因為無菌蒸餾水可能 pH值過低，所以一定要進(jìn)行測試。

如果實驗室只有去離子水或超純水，建議使用電阻 1-10 兆歐姆/ 厘米的水。確保 pH 為 7-9，使用之前要消毒。有時實驗室公共管路提供去離子水或一級超純水， 實際上來自初始蒸餾，所以只要滿足我們制定的參數(shù)，這樣的水就是可以使用的。

 如果沒有蒸餾水，選擇在培養(yǎng)箱中使用一級超純水或去離子水， 并加碳酸氫鈉在水中以提高 pH 值和添加一些離子。但它必須是無菌鹽溶液，并且確保水的pH 處于7-9 的范圍。

CO2 校準(zhǔn)

您可以校準(zhǔn)自己的 CO2，但也有幾個點您應(yīng)該知道的。如果您有 T/C 傳感器，確保任何校準(zhǔn)開始于早上，因為它可提供至少 12 小時不間斷的平衡，以確保穩(wěn)定的溫度和濕度。由于 T/C 測定工作與溫度和濕度相結(jié)合，保持水盤滿是重要的。如果水用完， 將有可能影響 T/C 傳感器校準(zhǔn)。Thermo Scientific VIOS 系列 CO2培養(yǎng)箱 T/C 傳感器具有濕度補(bǔ)償探頭， 將非常有利于 T/C 傳感器校準(zhǔn)。

對于 Heracell 培養(yǎng)箱，“Autostart”循環(huán)將自動將傳感器歸零。同時，Heracell 培養(yǎng)箱將自動補(bǔ)償可能影響室內(nèi)氣體濃度的壓力變化。

對于可控氧濃度的三氣培養(yǎng)箱而言，必須先校準(zhǔn) O2，使之在校準(zhǔn) CO2 之前穩(wěn)定下來。因為改變氧會改變CO2 校準(zhǔn)。

應(yīng)該多久校準(zhǔn)一次？

您可以每月使用富賴特二氧化碳測定儀或外部紅外測試儀對 CO2 濃度校準(zhǔn)。但是， 如果您正確地維護(hù)培養(yǎng)箱，并保持水盤滿，只需要每年定期校準(zhǔn)幾次，例如，每季度一次。請記住， 如果您有任何疑問， 可以聯(lián)系 Thermo Fisher Scientific 的售后服務(wù)專家。

 一般維護(hù)

除了需要偶爾檢查和校準(zhǔn) CO2 外，對于持續(xù)的維護(hù)培養(yǎng)箱性能需要做的事情很少。如果您選擇具有HEPA 過濾器的培養(yǎng)箱，應(yīng)每六個月到一年更換一次HEPA 過濾器。過濾器的壽命將取決于使用培養(yǎng)箱的人數(shù)和它的整體清潔和實驗室以及制造商的設(shè)計。

同時每六個月到一年更換一次進(jìn)氣過濾器（CO2 氣體進(jìn)入培養(yǎng)箱的過濾器），過程只需按照廠家的建議，或者安排一個合格的維修專家來做。

您應(yīng)該多久運行熱滅菌周期？

答案取決于您實驗室 平常的潔凈度，有多少人使用同一個培養(yǎng)箱，多久 打開門一次，以及過夜關(guān)閉培養(yǎng)箱是否方便。大多數(shù)用戶使用此功能的頻率在每月到每半年一次。

保持水盤中水的高度是培養(yǎng)箱日常維護(hù)的重要注意 事項之一。如果水盤水用完，將非常不利于您的細(xì) 胞的生長，因為當(dāng)水變干，濕度下降，導(dǎo)致水從培 養(yǎng)基中蒸發(fā)。當(dāng)濕度過低，原本平衡的鹽，礦物質(zhì)， 氨基酸等在生長培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度過高，將導(dǎo)致細(xì) 胞中毒和死亡 。如前文所述，過低的濕度不僅危害細(xì)胞生長，還極可能損壞CO2 傳感器。