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2024-09-12 09:59:45
作者: 高思維醫(yī)療
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它采用熒光染料與特異的靶分子結(jié)合,只有當(dāng)熒光染料與樣本中的特異分子(dsDNA,ssDNA或RNA或蛋白質(zhì))結(jié)合時(shí)才會(huì)發(fā)出熒光信號(hào),顯著降低buffer中其他分子(鹽、溶劑、洗滌劑以及游離核苷酸等)的對(duì)結(jié)果的影響。
在降低信號(hào)噪聲的同時(shí),還可準(zhǔn)確測(cè)量稀釋的樣品。Z少只需1μL樣品,Z低可以檢測(cè)到10 pg/μL DNA或12.5μg/mL蛋白質(zhì)。尤其適用于低濃度或者珍貴樣品,或者對(duì)下游準(zhǔn)確性要求高的實(shí)驗(yàn),如NGS,qPCR,轉(zhuǎn)染或顯微切割等。
此外,如果使用兩種染料:一種結(jié)合較大的完整和/或結(jié)構(gòu)化 RNA,而另一種結(jié)合較小的降解 RNA,Qubit熒光計(jì)還可快速評(píng)價(jià) RNA 的完整性和質(zhì)量。
目前提供2個(gè)機(jī)型,Qubit 4和Qubit Flex,其區(qū)別主要來自通量:Qubit 4一次檢測(cè)一個(gè)樣本,Qubit Flex一次可檢測(cè)多至8個(gè)樣本。對(duì)于初次使用的用戶,下面的視頻將幫助你快速了解如何操作Qubit 4和Qubit Flex。
對(duì)于操作中可能會(huì)出現(xiàn)的問題,以下問答供您參考。
Q:我是否每次都要用新的標(biāo)準(zhǔn)?
A:不需要。但是我們建議你在每次配置新的工作液時(shí)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品。保證標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都是用同一批working solution 進(jìn)行配制的。
Q:我是否需要校準(zhǔn)Qubit Flex 熒光計(jì)的8個(gè)管子?
A: 不需要,你可以在測(cè)量樣品的管子區(qū)域進(jìn)行校準(zhǔn)??赡苄枰獙ubit Flex熒光計(jì)固件版本升級(jí)到1.5.0或更新版本以啟用此選項(xiàng)。
Q:稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品可以保存多久?如果隨時(shí)間有蒸發(fā)怎么辦(明顯或不明顯)?
A:如果一批樣品使用相同的工作液,稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品可以使用至多3個(gè)小時(shí)。
Q:Qubit 熒光計(jì)可以對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行定量嗎?
A:可以。對(duì)于質(zhì)粒小抽,DNA含量高(超過50 ng/μL ),推薦使用 Qubit DNA BR assay ;對(duì)于“質(zhì)粒拯救(Plasmid rescue)”或其他方法獲得的小量DNA,使用Qubit DNA HS assay。
Q:Qubit Protein Assay 在樣品有去垢劑存在時(shí)是否可以正常工作?
A:可以兼容非常少量的去垢劑。請(qǐng)見 Qubit Protein Assay Kit product manual第6頁表2的“Contaminants Tolerated by the Qubit Protein Assay,”了解具體的耐受數(shù)量。
Q:為什么紫外吸收讀數(shù)比Qubit熒光計(jì)檢測(cè)獲得的數(shù)值高?
A:紫外吸收法不具有選擇性,測(cè)定樣品中所有分子在260nm處的吸光度,包括DNA,RNA,蛋白質(zhì),游離核苷酸,多余的鹽等。而Qubit則通過特異的熒光染料結(jié)合目標(biāo)分子,因此通常情況下總是比A260的讀數(shù)更低。
Q:使用Qubit熒光計(jì)時(shí),樣品檢測(cè)值隨時(shí)間越來越低,造成這種現(xiàn)象的原因是什么?
A:請(qǐng)參考以下建議:確保孵育2分鐘后上機(jī)檢測(cè)讀數(shù)(蛋白質(zhì)樣品孵育15分鐘)。如果你將檢測(cè)管留在儀器中,并反復(fù)讀取多次,那么讀數(shù)會(huì)變低,因?yàn)楣鼙谠趦x器內(nèi)會(huì)被加熱。如果您需要多次讀取,請(qǐng)將檢測(cè)管取出,放在試管架上,待其降至室溫30秒后再上機(jī)讀取。在避免光照的情況下,預(yù)混好的樣品檢測(cè)Z好在3小時(shí)內(nèi)完成。超過此時(shí)間,讀數(shù)將不再準(zhǔn)確。
Q:Qubit 熒光計(jì)可以儲(chǔ)存多少行數(shù)據(jù)?
A:Qubit 4 熒光計(jì)至多可以儲(chǔ)存1000個(gè)數(shù)據(jù),Qubit Flex可以存儲(chǔ)10,000個(gè)數(shù)據(jù)。
Q:熒光計(jì)的光源可以用多久?我要如何更換?
A:在Qubit 4和 Qubit Flex熒光計(jì)里有2個(gè)LED 光源。正常使用預(yù)計(jì)可以使用至少5年。
Q:我已經(jīng)有一臺(tái)Nanodrop,為什么還需要Qubit熒光計(jì)?
A:Nanodrop 儀器采用紫外吸光法,不能區(qū)分DNA,RNA,游離核苷酸和其他污染物,因此讀數(shù)偏高。此外,Qubit比NanoDrop更加靈敏,在低濃度范圍精確性高出很多。NanoDrop分光光度計(jì)全光譜吸光度讀數(shù)可以通過吸收峰顯示是否有污染物存在,這對(duì)可能會(huì)受到污染物危害的下游應(yīng)用領(lǐng)域非常有用。我們建議兩個(gè)儀器一起使用,Qubit可以精確測(cè)量低濃度樣品,而Nanodrop可以檢測(cè)污染物。



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