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使用 PCR 儀時(shí)，有以下諸多注意事項(xiàng)：

一、儀器操作前

1、環(huán)境要求：PCR 儀應(yīng)放置在平穩(wěn)、干燥、通風(fēng)良好且遠(yuǎn)離大型電機(jī)等強(qiáng)電磁干擾源的環(huán)境中，環(huán)境溫度一般建議維持在 10℃-30℃，相對濕度在 20%-80%，以保障儀器能正常穩(wěn)定運(yùn)行，避免因環(huán)境因素導(dǎo)致儀器性能受損或出現(xiàn)故障。

2、電源檢查：確認(rèn)所接入的電源電壓與 PCR 儀的額定電壓相符，并且要有良好的接地，防止出現(xiàn)漏電等電氣安全問題，保障儀器和操作人員的安全。

3、預(yù)熱準(zhǔn)備：部分 PCR 儀在使用前需要進(jìn)行預(yù)熱，按照儀器說明書規(guī)定的時(shí)間和要求進(jìn)行預(yù)熱操作，使儀器達(dá)到合適的工作狀態(tài)，有助于后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

二、樣本準(zhǔn)備及加樣環(huán)節(jié)

1、樣本處理規(guī)范：樣本的采集、提取、保存等過程要嚴(yán)格遵循相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，避免樣本受到污染，比如在核酸提取時(shí)要保證操作環(huán)境的潔凈、使用無核酸酶的耗材等，防止外源核酸混入影響后續(xù) PCR 擴(kuò)增結(jié)果。

2、加樣準(zhǔn)確性：準(zhǔn)確吸取反應(yīng)體系各成分，如模板 DNA、引物、dNTP、緩沖液、Taq 酶等，使用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器，并且要注意避免產(chǎn)生氣泡，確保各成分加入量的精準(zhǔn)，不然會(huì)影響擴(kuò)增反應(yīng)的效率和特異性。

3、防止交叉污染：在加樣過程中，要及時(shí)更換移液器槍頭，不同樣本之間不能共用槍頭，操作區(qū)域要保持干凈整潔，可使用一次性的防護(hù)墊等物品，防止樣本之間出現(xiàn)交叉污染，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。

三、儀器運(yùn)行過程中

1、參數(shù)設(shè)置正確：依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，準(zhǔn)確設(shè)置 PCR 反應(yīng)的各參數(shù)，包括變性溫度、退火溫度、延伸溫度、各階段的時(shí)間以及循環(huán)次數(shù)等，這些參數(shù)的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到能否成功擴(kuò)增出目標(biāo)片段以及擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)量等，設(shè)置后要仔細(xì)核對。

2、運(yùn)行狀態(tài)監(jiān)測：在儀器運(yùn)行期間，要留意觀察儀器的運(yùn)行狀態(tài)指示燈等，確保儀器正常運(yùn)轉(zhuǎn)，若出現(xiàn)異常報(bào)警聲或者顯示故障代碼等情況，要及時(shí)按照說明書提示排查問題，必要時(shí)停止運(yùn)行并聯(lián)系專業(yè)維修人員。

四、儀器使用后

1、關(guān)機(jī)與清潔：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，按照儀器的關(guān)機(jī)程序正常關(guān)閉 PCR 儀，不可直接切斷電源。定期對儀器的外部表面進(jìn)行清潔，使用柔軟干凈的濕布擦拭，去除灰塵等雜物，但要避免液體進(jìn)入儀器內(nèi)部，對于內(nèi)部的清潔，可聯(lián)系專業(yè)的維修保養(yǎng)人員按照規(guī)范來操作。

2、數(shù)據(jù)記錄與保存：及時(shí)記錄本次 PCR 實(shí)驗(yàn)所設(shè)置的參數(shù)以及儀器運(yùn)行的相關(guān)數(shù)據(jù)等，便于后續(xù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性驗(yàn)證等，并且要妥善保存好這些數(shù)據(jù)資料，可采用電子文檔等合適的存儲(chǔ)方式。

3、耗材清理：將使用過的 PCR 反應(yīng)管、移液器槍頭、一次性手套等耗材按照生物安全相關(guān)規(guī)定進(jìn)行妥善處理，防止對環(huán)境造成污染以及避免生物危害。