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QuantStudio 1是一個(gè)靈活的平臺(tái)，支持多種化學(xué)檢測(cè)方法?？偟膩碚f，可以分為兩大類：DNA結(jié)合染料 和水解探針。

一、賽默飛QuantStudio1實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)DNA結(jié)合染料

這類染料可以嵌入任何雙鏈DNA分子中，發(fā)出熒光，因此是一種非特異性的檢測(cè)方法。它成本較低，但無法區(qū)分特異性產(chǎn)物和非特異性產(chǎn)物（如引物二聚體）。

1、SYBR Green I：這是經(jīng)典、常用的DNA結(jié)合染料。當(dāng)它與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光信號(hào)會(huì)大大增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需要通過熔解曲線分析 來確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性。

2、EvaGreen：一種對(duì)PCR抑制更小、穩(wěn)定性更好的染料，尤其適合高分辨率熔解曲線分析。

二、賽默飛QuantStudio1實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)水解探針

這類方法利用一個(gè)序列特異性的探針，因此是特異性的檢測(cè)。它通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理來工作，只有在擴(kuò)增出目標(biāo)序列時(shí)才會(huì)報(bào)告熒光信號(hào)，特異性高，適合進(jìn)行多重檢測(cè)（同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)）。

1、TaqMan 探針：這是賽默飛世爾科技（Applied Biosystems）的技術(shù)，也是與QuantStudio系統(tǒng)Z“原配”的探針化學(xué)方法。在探針的5‘端帶有一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)，在3’端帶有一個(gè)淬滅基團(tuán)。

2、TaqMan探針常用的染料組合非常豐富，可以分為以下幾類：

（1）經(jīng)典的組合是 FAM（報(bào)告基團(tuán)） 搭配 TAMRA 或 MGB-NFQ（淬滅基團(tuán)）。

（2）現(xiàn)在主流、效果好的是使用MGB探針，其淬滅基團(tuán)通常是非熒光淬滅基團(tuán)，能獲得更低的背景和更高的信噪比。例如：FAM-MGB-NFQ。

注意：在設(shè)置多重實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須確保您儀器配置的光源和濾光片組支持您所選擇的染料組合。QuantStudio 1的標(biāo)準(zhǔn)配置通常支持FAM、VIC、ROX等常見染料。

三、總結(jié)建議

1、查看儀器配置：首先確認(rèn)您的QuantStudio 1具體配置了哪些激發(fā)光源和檢測(cè)濾光片，以確保您選擇的染料能被儀器識(shí)別。

2、實(shí)驗(yàn)?zāi)康臎Q定方法：

（1）如果只是看某個(gè)基因的表達(dá)量變化，且預(yù)算有限，SYBR Green 是重要選擇。

（2）如果需要進(jìn)行高精度的定量（如病毒載量），或檢測(cè)高度同源的序列，或在一個(gè)樣本中同時(shí)檢測(cè)多種病原體，請(qǐng)選擇TaqMan探針。

3、使用預(yù)混液：強(qiáng)烈建議使用賽默飛配套的預(yù)混液，如 PowerUp SYBR Green Master Mix (用于SYBR Green法) 或 TaqMan Universal Master Mix (用于TaqMan探針法)。這些預(yù)混液已經(jīng)優(yōu)化好，包含了除引物、模板和探針外的所有成分，能保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和重復(fù)性。