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伯樂(lè)CFX Opus 96進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，所需的試劑和耗材可以系統(tǒng)地分為以下幾大類：

一、伯樂(lè)CFX Opus96實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)核心反應(yīng)試劑

1、qPCR預(yù)混液（Master Mix）

（1）種類：根據(jù)檢測(cè)方法選擇。

（2）染料法：如SYBR Green qPCR Master Mix（含有SYBR Green I染料、Hot-Start DNA聚合酶、dNTPs、Mg2?、緩沖液等）。伯樂(lè)也推薦使用其自家的SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix，其性能與CFX系列儀器經(jīng)過(guò)優(yōu)化匹配。

（3）探針?lè)ǎ喝鏣aqMan探針?lè)▽Ｓ玫腗aster Mix。伯樂(lè)對(duì)應(yīng)的產(chǎn)品是SsoAdvanced Universal Probes Supermix。

關(guān)鍵點(diǎn)：務(wù)必確認(rèn)預(yù)混液是否包含ROX等被動(dòng)參考染料。CFX Opus 96等伯樂(lè)儀器不需要添加ROX進(jìn)行孔間信號(hào)校正，因此應(yīng)選擇不含ROX或“For ROX-free instruments”的預(yù)混液。

2、引物與探針

（1）染料法：需要特異性上游和下游引物。

（2）探針?lè)ǎ盒枰禺愋陨嫌魏拖掠我镆约皹?biāo)記了熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的寡核苷酸探針（如TaqMan探針）。

3、模板DNA/cDNA

純化好的基因組DNA、逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA或質(zhì)粒DNA等。

4、Nuclease-Free Water

無(wú)核酸酶水，用于稀釋和調(diào)整反應(yīng)體系體積。

二、伯樂(lè)CFX Opus96實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)耗材類

1、qPCR反應(yīng)板/八聯(lián)管

（1）96孔反應(yīng)板：常用。必須使用光學(xué)級(jí)透明的qPCR專用板，確保透光性和熱傳導(dǎo)性。板有平蓋和凸蓋之分，需根據(jù)儀器配備的加熱蓋壓力模式選擇（CFX Opus 96通常使用平蓋）。

（2）八聯(lián)管：靈活性高，適合樣本量少的實(shí)驗(yàn)。同樣需使用光學(xué)級(jí)透明管和對(duì)應(yīng)的平蓋/圓蓋。

（3）提示：強(qiáng)烈建議使用伯樂(lè)原裝或認(rèn)證兼容的耗材（如Hard-Shell? 96孔板），以獲得良好的光學(xué)性能和熱循環(huán)一致性。

2、光學(xué)密封膜

用于密封96孔板，防止蒸發(fā)和污染。必須是光學(xué)透明的密封膜，且能與孔板牢固粘合，在熱循環(huán)過(guò)程中不起皺、不翹邊。微孔板封板膜或光學(xué)封板膜是標(biāo)準(zhǔn)選擇。

三、伯樂(lè)CFX Opus96實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)輔助試劑與耗材

1、RNA提取試劑（如需從RNA開(kāi)始）：如TRIzol、柱式提取試劑盒等。

2、逆轉(zhuǎn)錄試劑（如需做RT-qPCR）：包含逆轉(zhuǎn)錄酶、隨機(jī)引物/oligo dT、dNTPs、RNase抑制劑等的試劑盒。

3、稀釋液：用于標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，通?？捎肨E緩沖液或nuclease-free water。

4、實(shí)驗(yàn)室通用耗材：

無(wú)菌、無(wú)核酸酶離心管（0.2mL PCR管，1.5mL，2.0mL）

帶濾芯槍頭（防止氣溶膠污染，規(guī)格如10μL， 200μL， 1000μL）

微型離心機(jī)

渦旋振蕩器

冰盒

四、質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)品

1、陽(yáng)性對(duì)照：已知含有目標(biāo)序列的模板。

2、陰性對(duì)照：

無(wú)模板對(duì)照：用水代替模板，監(jiān)測(cè)體系污染。

無(wú)逆轉(zhuǎn)錄對(duì)照：用于RT-qPCR，監(jiān)測(cè)基因組DNA污染。

3、標(biāo)準(zhǔn)品：用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線、定量分析。通常是已知濃度的梯度稀釋模板（質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物、合成寡核苷酸等）。