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一、熒光定量PCR檢測方法主要有4種，如下：

1、DNA結(jié)合染料法：應(yīng)用一種帶有熒光的、非特異的DNA結(jié)合染料檢測PCR過程中積累的擴(kuò)增產(chǎn)物。一般使用的是SYBR Green I染料，這是一種可以與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料，不會(huì)與單鏈DNA結(jié)合，并且在游離狀態(tài)下幾乎無熒光，只有與雙鏈DNA結(jié)合才會(huì)發(fā)出熒光，因此將PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的雙鏈DNA數(shù)量與熒光強(qiáng)度直接關(guān)聯(lián)，產(chǎn)生實(shí)時(shí)監(jiān)測的效果。

2、基于探針的化學(xué)法：應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；依賴熒光能量共振傳遞檢測特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。這是應(yīng)用于核酸定量、基因表達(dá)驗(yàn)證、等位基因鑒別、SNP分型、病原體和病毒檢測、多重PCR?；谔结樀幕瘜W(xué)法的優(yōu)點(diǎn)是探針法的鑒別能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于DNA結(jié)合染料法，因?yàn)樗鼈冎慌c目的產(chǎn)物結(jié)合，從不與引物二聚體或其他非特異產(chǎn)物結(jié)合，缺點(diǎn)是它的合成價(jià)格高。

3、絕對(duì)定量：絕對(duì)定量是用己知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來推算未知樣品的量。將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至不同濃度，作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。以標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以測得的CT值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)未知樣品進(jìn)行定量時(shí)，根據(jù)未知樣品的CT值，即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線中得到樣品的拷貝數(shù)。

4、相對(duì)定量：相對(duì)定量一般是采用參照內(nèi)參基因，通過對(duì)比內(nèi)參基因判斷特定樣本中目的基因基因表達(dá)量上調(diào)或下降的倍數(shù)。該方法要求內(nèi)參基因和目的基因具有相同的擴(kuò)增效率，并盡可能接近100%。

這些就是熒光定量PCR的主要檢測方法。

二、熒光定量PCR應(yīng)用環(huán)境有哪幾種？

熒光定量PCR技術(shù)具有高靈敏度、快速、準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，因此廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測、食品安全等領(lǐng)域。

1、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域：熒光定量PCR被用于病毒感染、癌癥診斷等方面。例如，通過熒光定量PCR技術(shù)，可以檢測血液或其他生物樣品中是否存在特定的病毒或癌細(xì)胞。

2、生物學(xué)領(lǐng)域：熒光定量PCR被用于基因表達(dá)、基因型鑒定等方面。例如，通過熒光定量PCR，可以測量特定基因在不同組織或不同生長條件下的表達(dá)水平，或者鑒定生物體的基因型。

3、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域：熒光定量PCR被用于水質(zhì)檢測、土壤污染等方面。例如，通過熒光定量PCR，可以檢測水樣中是否存在特定的污染物，或者測量土壤中某種污染物的濃度。